Острые респираторные инфекции являются наиболее распространенными заболеваниями в современном мире. Ежегодно люди сталкиваются с эпидемиями гриппа, которые поражают до 15% населения. А учитывая высокую изменчивость вирусов, приходится постоянно совершенствовать методы лабораторной диагностики. Поэтому анализы при гриппе представляют собой актуальный вопрос, требующий подробного рассмотрения.
Общие сведения
Грипп – это высоко заразное инфекционное заболевание вирусной природы. Он поражает преимущественно верхние отделы респираторного тракта, но могут вовлекаться также бронхи и легкие. Возбудителем выступают вирусы нескольких серотипов: A, B, C. Первый обладает наибольшей изменчивостью, поскольку содержит на своей поверхности 3 вида гемагглютинина (H) и 2 варианта нейраминидазы (N). Это ферменты, которые отвечают за цитопатическое действие возбудителя. На самом деле таких модификаций гораздо больше, просто остальные преимущественно вызывают болезнь у животных. В настоящее время причиной инфекции становятся два вируса гриппа A: H1N1 (калифорнийский) H3N2 (гонконгский).
Вирус передается человеку воздушно-капельным путем и поселяется на эпителии дыхательных путей. Инкубационный период гриппа короткий – от нескольких часов до пары дней. Как правило, болезнь протекает в легкой форме, с момента контакта с заболевшим до выздоровления проходит до 7 суток. Основными симптомами респираторной инфекции становятся:
- Высокая лихорадка.
- Сухой кашель.
- Боли в горле.
- Заложенность носа.
- Головные боли.
- Ломота в теле, мышцах и суставах.
- Одутловатость и покраснение лица.
- Инъекция сосудов склеры.
Но у ряда пациентов болезнь протекает в тяжелой форме. В основном это касается детей, беременных и лиц с сопутствующей патологией. У них вероятна сильная интоксикация и осложнения: пневмонии, гломерулонефрит, нейропатии, шок, отек легких и головного мозга. Поэтому крайне важное значение отводится своевременной лабораторной диагностике гриппа.
Показания
Безусловно, анализ на грипп необходим тем, у кого после клинического обследования врач предполагает указанную инфекцию. Это могут быть различные ОРВИ с синдромом интоксикации. Схожие черты с гриппом есть у таких инфекций:
- Аденовирусная.
- Респираторно-синцитиальная.
- Риновирусная.
- Парагрипп.
- Корь.
В дифференциальной диагностике могут нуждаться также случаи микоплазменной пневмонии, а также других заболеваний с продромальным периодом: брюшной и сыпной тиф, лептоспироз, вирусные гепатиты. Но основная сфера назначения анализов – гриппоподобные состояния. Это позволяет не только выявить возбудителя, но и установить его серотипы.
Анализы на вирус гриппа показаны пациентам, у которых есть соответствующие клинические симптомы.
Проведение
Перед проведением анализа врач детально оценивает клинические данные и состояние пациента. По результатам осмотра выдается направление в лабораторию (например, Инвитро). Существует несколько видов лабораторных исследований, необходимых при подозрении на грипп. К ним относятся:
- Общий анализ крови.
- Экспресс-тесты.
- Посев на культуру клеток.
- Серологический анализ.
- Молекулярно-генетический метод.
Каждое исследование имеет свои особенности, преимущества и недостатки. Но решение о том, какие анализы проводить, принимается врачом. Он также скажет, как следует подготовиться к взятию биоматериала. Пациенту лишь следует выполнять рекомендации специалиста.
Общий анализ крови
Изменения в организме, происходящие при инфицировании вирусом, можно определить по общему (клиническому) анализу крови. Он не позволяет идентифицировать возбудителя, но дает косвенные подсказки о его воздействии на организм и позволяет установить степень тяжести болезни. Исследование проводится натощак. Берется кровь из пальца путем прокалывания стерильным скарификатором и набирания в стеклянный капилляр. Далее подсчитываются форменные элементы (лейко-, эритро- и тромбоциты), содержание гемоглобина, определяется СОЭ и цветной показатель.
Экспресс-тесты
Относительно новым и развивающимся направлением диагностики гриппа считаются экспресс-тесты. Они основаны на иммунохроматографическом определении антигенов (вирусных частиц). На тест-полоску нанесены стандартные антитела к вирусам гриппа A и B, меченые специальным красителем. Он становится виден только при наличии в образце антигенов возбудителя, то есть образовании специфических иммунных комплексов.
Сначала необходимо взять биоматериал – мазок слизи из носа. Пациента просят запрокинуть голову назад. Стерильный тупфер вводят в ноздрю и, оборачивая его там, касаются стенок ходов. Это не очень приятно, из-за щекотания в носу могут слезиться глаза. Поэтому у детей чаще используют назальные смывы – физиологический раствор вводят в ноздрю со шприца и отсасывают слизь. Затем материал помещают в специальный флакон с жидкостью-реагентом, взбалтывая его для хорошего перемешивания. Несколько капель наносят на тест-полоску в специальное окошко. Так делается и экспресс-анализ на свиной грипп (калифорнийский).
Посев на культуру клеток
Материал, полученный от пациента (мазки или смывы), для идентификации вируса засевается на клеточную культуру: слой фибробластов куриного эмбриона (чаще всего), почек обезьян, собак или крупного рогатого скота. Образцы инкубируют в термостатах при температуре человеческого тела. Вирус вызывает цитопатическое действие, проявляющееся в разрушении клеточного слоя. Если такая реакция произошла, то материал переносят на другую среду для определения гемагглютинирующих свойств. Для дальнейшего изучения антигенной структуры и типирования вируса выполняют реакцию с гриппозными диагностикумами.
Средой для культивирования вирусов гриппа выступает клеточная культура. При посеве можно выявить признаки повреждающего действия возбудителя, а дальнейший анализ позволит его идентифицировать.
Серологические анализы
Наиболее распространено серологическое исследование при гриппе. Оно основано на определении антител к вирусу в организме пациента. Это можно сделать в любой современной лаборатории (Инвитро, Синэво и пр.). Для анализа следует сдавать венозную кровь по общепринятым правилам с 5–7 дня болезни. Затем ее центрифугируют, отделяя форменные элементы от сыворотки. Последнюю используют в различных реакциях:
- Торможения гемагглютинации (РТГА).
- Связывания комплемента (РСК).
- Нейтрализации (РН).
- Иммуноферментного анализа (ИФА).
Чаще всего приходится анализировать кровь, взятую двукратно с интервалом 7–10 суток. Это позволяет оценить титр антител в динамике. Каждый из методов имеет определенную методику выполнения, но принцип один и тот же: иммуноглобулины сыворотки связываются со стандартными антигенами, образуя комплекс. Последний идентифицируется при помощи других реагентов (красителей, ферментов). Но учитывая образование антител в организме лишь со второй недели болезни, серологический анализ крови при гриппе имеет в основном ретроспективное значение.
Молекулярно-генетический метод
С помощью метода полимеразной цепной реакции можно не только выявить вирус гриппа, но и произвести его типирование, т. е. идентификацию. Для этого сначала берут мазок (смывы) из носа. Затем материал смешивают со специальным реагентом, содержащим праймер и ферменты, помещая его в аппарат для амплификации. В нем происходит многократное копирование вирусной РНК и фотохроматографическая детекция. Молекулярно-генетическое исследование позволяет выявить очень малые количества возбудителя и провести дифференциальную диагностику. А благодаря усовершенствованной методике – ПЦР в реальном времени – удается минимизировать сроки выполнения анализа.
Результаты
Сроки проведения исследований различны – от 10 минут (экспресс-тест) до 48 часов (культуральный метод, ПЦР). Иногда при гриппе анализы требуют дальнейшего подтверждения более специфичными и чувствительными методиками, что приводит к замедлению диагностики. А полученные результаты должны интерпретироваться лишь специалистом.
Общий анализ крови
В первые сутки болезни в крови отмечается лейкоцитоз со сдвигом формулы влево. Увеличивается число палочкоядерных нейтрофилов и юных. Далее уровень лейкоцитов при гриппе заметно снижается, что сохраняется в течение всего периода, вплоть до выздоровления. Отмечается относительный лимфоцитоз, СОЭ остается в пределах нормальных значений. Любая лаборатория может сделать такой анализ, а не только Инвитро.
Экспресс-тест
Наиболее быстрый анализ может дать лишь качественный результат в отношении вирусов A или B. После нанесения материала на тест-системе появляется две полоски: одна контрольная, а другая говорит о выявлении возбудителя. Цвет красителя может отличаться, в зависимости от производителя. Если же выявлена лишь контрольная линия, то тест считается отрицательным. При положительном результате необходимо обязательное дообследование, поэтому пациенту придется еще сдать анализ на свиной (или другой) грипп.
Результат экспресс-теста оценивается уже спустя 10 минут после нанесения в него материала. Как его интерпретировать, указано в инструкции по применению.
Посев на культуру клеток
Когда после заражения культуры клеток в ней выявляются признаки цитопатического действия, это свидетельствует о наличии вируса в исследуемом материале. Возбудитель гриппа вызывает разрушение биологического слоя. А при пересевании на другую среду наблюдается гемагглютинация – слипание эритроцитов под воздействием ферментов вируса.
Серологические анализы
Серологическая диагностика производится так называемым методом парных сывороток. Антитела к вирусу, независимо от технологии их идентификации, должны не просто присутствовать у больного гриппом, но и нарастать в динамике. Диагностическим титром считается увеличение уровня иммуноглобулинов в 4 и более раз с интервалом в 7–10 дней.
Молекулярно-генетический метод
Результат полимеразной цепной реакции может быть представлен в качественном, полуколичественном или количественном виде. Последний вариант наиболее предпочтителен, поскольку указывает на степень вирусной нагрузки и вполне годится для оценки тяжести состояния пациента. Но и простое указание на выявление в образце биоматериала РНК возбудителя несомненно подтверждает диагноз. Это наиболее точный и чувствительный метод диагностики гриппа.
Выбор лаборатории
Каждый пациент хочет, чтобы результаты его исследований были достоверными. Поэтому вопрос о том, где сдать анализ, является очень актуальным. Следует отметить, что качество диагностики зависит от многих моментов: подготовки персонала, наличия оборудования и материалов, соблюдения правил взятия биоматериала, его транспортировки и хранения. В крупных лабораториях с развитой сетью (например, таких, как Инвитро) соблюдены и контролируются все ключевые аспекты. В выборе места, где можно сдать мазок из носа или кровь, однозначно поможет врач с учетом собственного опыта.
Важную роль при гриппе играют лабораторные методы исследования. Для постановки диагноза необходимо выявить сам вирус и определить его вид, в чем помогут различные анализы. Одни из них идентифицируют возбудителя, а другие указывают на косвенные признаки его присутствия. Но что именно сдавать в конкретном случае, подскажет лишь врач.