Как известно, со временем многие бактерии перестают реагировать на применяемые ранее противомикробные препараты. Эмпирическая терапия антибиотиками, которая учитывает природную чувствительность микроорганизмов, может быть назначена больному сразу, без проведения дополнительных исследований, но она не всегда приводит к выздоровлению. Именно поэтому специалисты все чаще назначают этиотропную антибиотикотерапию, которая подбирается индивидуально для каждого человеческого организма.
Содержание
Правила определения чувствительности
Проявляемая микроорганизмами устойчивость к антибактериальной терапии может быть врожденной или приобретенной. При врожденной резистентности бактерия нейтрализует действие препаратов с помощью ферментов либо же имеют непроницаемую по отношению к ним бактериальную мембрану. Обычно микроорганизм обретает устойчивость к ранее эффективным антибиотикам в результате мутаций.
Определение чувствительности к антибиотикам бактерий всегда проходит в несколько этапов:
- Осуществляется забор материала.
- Доставляется в лабораторию.
- Проводится посев на питательные среды.
- Выделяется вид и штамм микроорганизма.
- Изучается восприимчивость к антибиотикам.
Для определения чувствительности патогенных бактерий используют методы диффузии и разведения, провести которые можно различными способами.
Методы диффузии
Для определения чувствительности к антибиотикам таким способом, используют:
- Диски. Метод относится к качественным и является наиболее используемым. На среду густо высеивают изучаемую культуру. Обычно пользуются рыбным бульоном, агар-агаром, натрий фосфат двузамещенным. Затем сверху располагают бумажные диски в количестве не более 6 штук, соблюдая между ними дистанцию в 2 см. Инкубация в термостате длится в течение суток, при температуре 37 °С. Оценку для данного определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам дают по зоне подавления роста возле дисков. Ее появление говорит о чувствительности микробов к антибиотикам или же об их умеренной резистентности, что зависит от диаметра зоны. Ее отсутствие указывает на устойчивость возбудителей к изучаемым антибактериальным препаратам.
- Е-тест проводят с помощью специальной полоски. Выполняется тест по аналогии с предыдущим. На полоске имеются разметки, указывающие на минимальное или высокое содержание антибиотика.
Рассмотренные методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам имеют как преимущества, так и недостатки. Так, не все антибактериальные препараты можно использовать в исследованиях, поскольку некоторые из них имеют плохо диффундирующую способность. Это касается таких антибиотиков, как полимиксин и ристомицин.
Е-тестом пользуются довольно редко, что связано с высокой стоимостью данного метода. Метод дисков довольно прост и проводится в любой баклаборатории.
Методы разведения
Данным способом определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам проходит с использованием жидкой среды или агара. Методы разведения позволяют установить минимальное содержание антибактериального препарата, при котором он подавляет рост изучаемых патогенных бактерий.
Первоначально изготавливается основной раствор, из которого затем производят все остальные. Затем к ним добавляют 0,1 мл изучаемого возбудителя. В конце оставляют пробирку для контроля.
Исследуемые пробирки подвергают инкубации при температуре 37 °С на протяжении 18–24 часов.
Оценивают такое определение чувствительности бактерий к антибиотикам при помощи таблиц. Все изучаемые растворы сравнивают с контрольным. Отсутствие помутнения в исследуемых пробирках свидетельствует об успешном ингибирующем воздействии данной концентрации препарата на рост бактерий.
Сохраняющееся помутнение, наоборот, указывает на неспособность антибиотика подавить жизнедеятельность микроорганизма.
Данный способ исследования относится к количественным, так как позволяет рассчитать минимальную концентрацию антибактериального препарата, в которой он угнетает рост бактерий.
С помощью данных методов можно выявить дозировку антибиотика, которая проявит наибольшую эффективность в лечении и не вызовет при этом в дальнейшем у микроорганизмов резистентности.
Определение антибиотика в биологических жидкостях
Еще один из доступных методов выявления чувствительности бактерий к используемым антибактериальным препаратам. Вначале исследования ставят 2 ряда пробирок – с эталонным антибиотиком и с биологической жидкостью (кровью или мочой). Тест-бактерии, которые изготавливают в среде Гипса с глюкозой, вводят в каждую исследуемую пробирку. Если биологическую жидкость изучают на чувствительность к пенициллину, тетрациклину и эритромицину, то в роли тест-бактерии выступает S.aureus, а если к стрептомицину – то E.coli.
Подготовленные посевы помещают в термостат и инкубируют при температуре 37 °С на протяжении 18–24 часов. Оценивают результаты этого исследования согласно степени помутнения и окрашивания индикатора.
Чувствительность S.aureus к пенициллину
Бульонную культуру стафилококка в количестве 0,5 мл смешивают в колбе с 20 мл питательного агара (с температурой 45 °С). Полученную смесь перемешивают и перемещают в чашку Петри. Как только агар застывает, в центр чашки кладут диск с пенициллином, по радиусам которого отмечают исследуемые культуры.
Оценивают результаты спустя сутки после инкубации. Если появилась зона роста стафилококка вокруг диска, это свидетельствует о способности возбудителя продуцировать бета-лактамазу, которая, в свою очередь, повышает его невосприимчивость к пенициллину.