Микробиологическая диагностика коклюша


К числу острых инфекционных недугов детского возраста относится коклюш. Заболевание носит воспалительный характер, в который вовлекаются слизистые оболочки гортани, трахеи, бронхов и бронхиол. Отличительным фактором является спастический, приступообразный кашель и цикличность процесса.

Общие сведения

Исторические сведения о заболевании идут еще со времен средневековых эпидемий в странах Европы. Возбудителем является Bordetella pertussis, которая была подробно описана в 1906 году бельгийским и французским учеными Жюлем Борде и Октавом Жангу. Вакцинация же стала возможна только через полвека.

Морфологическим и генетическим сходством с Bordetella pertussis обладает Bordetella parapertussis. Палочка паракоклюша вызывает коклюшеподобное заболевание, но в значительно легкой форме.

Микробиология возбудителя

Ярким представителем возбудителей острых респираторных заболеваний является род Bordetella. Наиболее значимы среди них в эпидемиологическом плане бактерии коклюша и паракоклюша. Bordetella pertussis (возбудитель коклюша) – мелкая овальная палочка с закругленными краями, споры и жгутики у нее отсутствуют, неподвижна.

Все представители данного рода грамотрицательны, имеют вид палочек довольно малого размера.


Микробиология коклюша:

  • Структурными особенностями бактерии являются микрокапсула, белковые пили (микроскопические ворсинки) и клеточная стенка с наружной и внутренней перегородкой.
  • На начальном этапе развития палочка коклюша содержит факторы, которые определяют клинические проявления и патогенез заболевания: термолабильный токсин, гистамин-сенсебилизирующий фактор и др.
  • Микроб очень неустойчив в окружающей среде, погибает при воздействии ультрафиолета и свежего воздуха в течение 60 мин, быстро нейтрализуется дезрастворами.
  • Bordetella pertussis является облигатным аэробом (жизнеспособна только в присутствии кислорода), размножается при температуре 370С на строго определенных средах. Колонии на среде имеют вид блестящей капли ртути или жемчужины.

Палочка паракоклюша в размерах несколько превосходит исходную бактерию коклюша. Морфология коклюша и паракоклюша схожа, но имеются различия в особенностях роста и во внешнем виде колоний.

Диагностика


Заболевание отличается довольно длительным течением, что дает возможность в диагностике использовать такие методики, как: микроскопическая, серологическая, и прикладная микробиология. Коклюш определяется на любом этапе развития воспалительного процесса.

Микроскопия

Возбудитель имеет четкие морфологические особенности только на I этапе заболевания, поэтому микроскопия не является главным методом в диагностике коклюша. Но он незаменим при определении стадий патологического процесса, потому что вид микроорганизма разнится при переходе болезни из I стадии во II и III.

Бактериологический метод исследования

На сегодняшний день самым ранним и информативным методом диагностики является анализ свежевыделенной культуры бактерий. Уже на 3–4-й день он дает возможность отличить палочку коклюша от возбудителей септического бронхита и паракоклюша.

Материалом для микробиологического анализа служит мокрота и смывы из глотки человека. Для забора материала часто используется метод «кашлевых пластинок». Для этого чашку Петри вместе со средой подносят вертикально ко рту пациента при кашле (нужно уловить 4–5 кашлевых выдохов), после чего чашку закрывают и термостатируют.

Так как Bordetella pertussis очень прихотлива к трофическому субстрату и условиям роста, для выращивания культуры пользуются элективными средами:

  • Молочно-кровяным агаром Осиповой.
  • Средой Борде-Жангу (картофель-глицериновый агар с кровью кролика).
  • Уголь-картофельным агаром.

Для исключения роста бактерий-загрязнителей на чашках в среду добавляется антибиотик.

Самой подходящей температурой культивирования является интервал 35–37 градусов, рН среды должен быть нейтральным (в районе 7,2).

Колонии палочек коклюша появляются на 3–4 день от посева, они мелкие, выпуклые, прозрачные, глянцеватые, похожи на капли ртути, с зоной гемолиза по периметру (если в среде есть кровь), около 1 мм в диаметре. Колонии микробов паракоклюша больше по размеру, чем исходные, появляются раньше и дают выраженное окрашивание среды в коричневый цвет на козеиновом агаре.

Скопления бактерий рассматривают при помощи лупы или микроскопа. Подозрительные колонии отбирают для окрашивания по Граму.

Серология

Серологические способы исследования подходят для ретроспективной диагностики, т. к. антитела в крови больного появляются только на 3–4 неделе болезни. Обнаружить данные антитела возможно в ходе реакции агглютинации и реакции связывания комплемента по Борде-Жангу.

 


iv>